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水问趣问|原位杂交实验,如何选水?

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水问趣问|原位杂交实验,如何选水?

发布日期:2018-06-28 作者: 点击:

对生物而言,水是不可或缺的物质,这是因为生物体内大多数的反应都需要水分子的参与。超纯水可用于液体的培养基的配置,各种酶的反应,或者作为分子间相互作用的反应液。当我们进行体外反应时,如何尽可能的与体内反应一致是非常重要的,若混入与体内反应不相干的物质,便可能造成反应速率的抑制,因此对这些不相干的物质必须加以去除。在原位杂交实验中对于纯水的要求就显得十分苛刻。该水应可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等,以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。

实验便发现使用无RNA酶的超纯水进行原位杂交反应,并与DEPC(Diethyl pyro carbonate )处理水进行比较(所谓DEPC处理,是传统的无RNA酶水的制作方法。这是在纯水中加入0.1%(v/v)的DEPC,经数小时的搅拌使RNase失去活性,之后再进一步以高压灭菌锅来分解残留的DEPC,两种水质在原位杂交反应中具有相同效果。

若同时拥有DEPC 水和无RNA酶的超纯水时,哪一个会是更好的选择呢?

由于DEPC处理过程相当耗费时间,增加了原位杂交的实验步骤。而且有报告指出DEPC有致癌性,应避免使用。同时DEPC属于强化学修饰剂,高温高压处理后仍有残留的可能性,会对其他的酶活性产生抑制,并对RNA造成修饰作用。

为了分析RNA样品在DEPC水中的稳定性,我们将市售的Total RNA分别溶解于超纯水(经超滤膜与紫外线照射)与DEPC水中,于37℃静置1小时,24小时后比较其稳定性。结果显示,24个小时后,DEPC水中的RNA已完全被分解,而超纯水中的RNA只发生微量的分解。由此可见这种同时具有超滤膜与紫外灯照射的超纯水系统所提供的无RNA酶水可以同时兼顾实验者的安全性、工作效率和实验的精确性。

近来,在生物学与分子生物学领域中经常使用LC/MS、HPLC与DNA芯片等仪器进行分析检测,因此需要使用不含内毒素、RNA酶且有机物含量极低的超纯水。DEPC处理水虽然不含有RNA酶,但含有许多DEPC分解后所产生的离子与有机物质,对分析检测造成影响。因此,实验时使用即取即用的无RNA酶超纯水,就能避免由于在DEPC处理而导致对实验的不利影响。

在无RNA酶的条件下,调查了两种水质(经过超滤膜和紫外线灯照射的超纯水和蒸馏水)对实验的影响(图2)。实验结果可见:与超纯水相比,使用蒸馏水的实验结果信号强度较弱。在RNA实验中,有可能会由于试剂和水的存放引起RNA酶的污染,所以请务必对于无RNA酶水即取即用。

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图2 鼠脑组织切片肌动蛋白原位杂交的结果

因此水问生物针对生化实验对纯水的需求,生产出了两种瓶装规格(分别为500ml和1000ml)生命科学专用的瓶装超纯水(图3)。水问生物瓶装超纯水拥有自身独特的生产过程和高质量的品质保证。

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图3 水问生命科学专用瓶装超纯水500ml规格


☆ SWAN水问生物采用独特生产工艺进行生物学实验用水的生产。

☆ 超净生产环境符合ISO9001/cGMP相关标

☆ 采用无DEPC方法生产无菌、无DNase、无RNase和无蛋白酶的超纯水生产工艺

☆ 采用无菌、无DNase、无RNase和无蛋白酶的高纯容器是作为超纯水储存容器。

☆ 出厂前进行严格而全面的质量检测,提供产品质量合格证书。

☆ 提供详细的水质参数检测过程说明和检测结果,全面满足各类实验不同的关键参数要求

☆ 完备的检测设备,例如 ICP-MS,IC,UPLC,TOC

我们的目标是让您花费百元也可以获得与价值万元纯水机所制品质同等甚至更优的纯水。在降低实验经费支出的同时,我们更希望水问生物瓶装纯水可以出色地服务于的科学实验的方方面面。

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